細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書
上海起發(fā)生物科技有限公司（Shanghai BioHub Biotechnology Co., Ltd.）屬于上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司（2009年成立）旗下的子公司，成立的初衷是建立上海起發(fā)生物自有品牌，打造優(yōu)質(zhì)的生物試劑民族自有品牌。降低成本的同時(shí)，把好生物產(chǎn)業(yè)鏈中的國(guó)產(chǎn)生物試劑品質(zhì)關(guān)。未來(lái)讓每一個(gè)和我們一樣擁有民族情懷的企業(yè)，共同創(chuàng)世界優(yōu)秀的中國(guó)生物制造企業(yè)，圓夢(mèng)中國(guó)。
產(chǎn)品詳情
貨號(hào) | 規(guī)格 | 價(jià)格 |
78EA10010-100T | 100T | 詢價(jià) |
產(chǎn)品描述
細(xì)胞周期（cell cycle）是指連續(xù)分裂的細(xì)胞從一次分裂完成開始到下次分裂為止的全過(guò)程，分為間期和分裂期（M期），細(xì)胞間期又分為休眠期（G0期）,DNA合成前期（G1期），DNA合成期（S期），DNA合成后期（G2期）整個(gè)周期可以表示為：G0-G1-S-G2-M。
本公司生產(chǎn)的細(xì)胞周期檢測(cè)是通過(guò)經(jīng)典的碘化丙啶染色色 (Propidium iodide staining，PI staining)方法進(jìn)行周期分析的檢測(cè)試劑盒。PI是一種DNA的熒光染料，可以結(jié)合雙鏈DNA產(chǎn)生熒光，其熒光強(qiáng)度與DNA的含量成正比。經(jīng)碘化丙啶染色后假設(shè)G0/G1期細(xì)胞的熒光強(qiáng)度為1，那么含有雙份基因組DNA的G2/M期細(xì)胞的熒光強(qiáng)度的理論值為2，正在進(jìn)行DNA復(fù)制的S期細(xì)胞的熒光強(qiáng)度為1-2之間。凋亡細(xì)胞由于細(xì)胞核發(fā)生濃縮以及發(fā)生DNA片段化導(dǎo)致部分基因組DNA片段在染色過(guò)程中丟失，因此凋亡細(xì)胞碘化丙啶染色后呈現(xiàn)明顯的弱染，即熒光強(qiáng)度小于1，在流式檢測(cè)的熒光圖上出現(xiàn)所謂的sub-G1峰，即凋亡細(xì)胞峰。利用流式細(xì)胞儀進(jìn)行熒光分析從而對(duì)DNA進(jìn)行定量，實(shí)現(xiàn)細(xì)胞周期檢測(cè)。
產(chǎn)品組成
本試劑盒常用于貼壁細(xì)胞或者懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)，如果檢測(cè)對(duì)象為組織樣品，必須消化成單個(gè)細(xì)胞后在進(jìn)行染色檢測(cè)，規(guī)格為50T，每T可檢測(cè)的樣本的細(xì)胞數(shù)量在10-100萬(wàn)之間。
名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
染色緩沖液 | 25 mL | -20℃ |
碘化丙啶染色液(20X) | 1.25 mL | -20℃ |
RNase A (50X) | 0.5 mL | -20℃ |
運(yùn)輸與保存
冰袋運(yùn)輸，-20℃保存一年。
實(shí)驗(yàn)步驟
1. 細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備：
a. 對(duì)于貼壁細(xì)胞：收集培養(yǎng)液上清，PBS潤(rùn)洗細(xì)胞一遍，胰酶消化細(xì)胞，加入前面收集的培養(yǎng)液終止消化，得到的細(xì)胞懸液1000g離心5min收集細(xì)胞沉淀備用。
b. 對(duì)于懸浮細(xì)胞：1000g左右離心3-5 min，沉淀細(xì)胞。
（如果細(xì)胞沉淀不充分，可以適當(dāng)延長(zhǎng)離心時(shí)間或稍稍加大離心力）
2.細(xì)胞固定：
（1）向步驟1收集得到的沉淀中加入300 μL預(yù)冷的PBS，輕柔吹打混勻，輕柔渦旋的過(guò)程中滴加700 μL預(yù)冷的無(wú)水乙醇，最后于4℃固定30 min或更長(zhǎng)時(shí)間。通常固定2 h或以上更能保證染色效果，固定12-24h可能效果更佳。
（2）1000g左右離心5 min去除固定液，預(yù)冷PBS清洗一遍后再次離心，小心吸除上清，可以殘留約50微升左右的PBS，以避免吸走細(xì)胞。輕輕彈擊離心管底以適當(dāng)分散細(xì)胞，避免細(xì)胞成團(tuán)。
3. 細(xì)胞染色：
（1）參考下表配制碘化丙啶染色液（配置好的碘化丙啶染色液4℃保存，宜當(dāng)日內(nèi)使用）：
名稱 | 1個(gè)樣品 |
染色緩沖液 | 0.5 mL |
碘化丙啶染色液(20X) | 25 μL |
RNase A (50X) | 10 μL |
總體積 | 0.535 mL |
（2）每個(gè)樣品中加入0.5 mL的碘化丙啶染色液緩慢并充分重懸細(xì)胞沉淀， 37oC避光孵育30min。隨后可以4oC或冰浴避光存放。染色完成后宜在24 h內(nèi)完成流式檢測(cè)。
4.流式檢測(cè)分析：檢測(cè)激發(fā)波長(zhǎng)為488 nm處紅色熒光，用流式細(xì)胞儀對(duì)DNA含量進(jìn)行分析，確定細(xì)胞周期變化情況。
注意事項(xiàng)
（1）需自備PBS和70%乙醇，整個(gè)過(guò)程避光操作。
（2）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套。
（3）本產(chǎn)品僅作科研用途！
